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檢測植物elisa試劑盒操作步驟
發(fā)布時(shí)間： 2021-09-24 點(diǎn)擊次數(shù)： 2421次檢測植物試劑盒操作步驟：
1.編號(hào)：將樣品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 a50μl，再加入顯色劑 b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（od 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值 0.15
陰性判定：樣品 od 值< 臨界值（cut off）者為金葡萄球菌腸毒素(se)陰性 陽性判定：樣品 od 值≥ 臨界值（cut off）者為金葡萄球菌腸毒素(se)陽性。