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1．無菌環(huán)境

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞系的首要條件。細胞系在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細胞系在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細胞系能在體外環(huán)境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。

常見的微生物污染有支原體、細菌、真菌。支原體無致死毒性，可與細胞系長期共存，對細胞系有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測。細菌增殖快，在短時間內(nèi)即可大量擴增，并產(chǎn)生毒素殺死細胞系。真菌的種類繁多，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上，可呈絲狀、管狀或樹枝狀等。

2. 合適的溫度

一般哺乳類與禽類細胞系在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞系的生長。細胞系對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力，在低溫下，細胞系的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細胞系代謝受到影響，但無損傷作用；25～35℃時，細胞系以緩慢的速度生長；但若被置于40℃數(shù)小時，則不僅不利于細胞系生存、生長，甚至可導致其死亡。

3．氣體環(huán)境與pH

細胞系的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細胞系生存的必要條件。氧氣參與細胞系的三羧酸循環(huán)，為細胞系生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞系的代謝產(chǎn)物，是細胞系生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關。大多數(shù)細胞系適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。

4. 適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會引起細胞系發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞系的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞系對滲透壓都有一定的耐受能力，實際應用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞系。

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