蝦白斑病毒（WSSV）酶聯免疫分析ELISA試劑盒

試劑盒使用說明書
 

蝦白斑病毒（WSSV）酶聯免疫分析ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。
 

蝦白斑病毒（WSSV）酶聯免疫分析ELISA試劑盒

使用目的：
　　本試劑盒用于測定蝦血清、血漿及相關液體樣本中白斑病毒（WSSV）表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中蝦白斑病毒（WSSV）表達。用純化的蝦白斑病毒（WSSV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中白斑病毒（WSSV）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的白斑病毒（WSSV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中蝦白斑病毒（WSSV）的存在與否。
　　　試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算和結果判定：
　  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
　  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
　  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為蝦白斑病毒（WSSV）陰性
　  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為蝦白斑病毒（WSSV）陽性
　。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
NT2438-10g p-Nitrophenyl-azo-orcinol 鈹試劑Ⅰ [607-96-5] 10g
N2609-25g 4-（p-Nitrophenyl-azo）-resorcinol 鎂試劑 I [74-39-5] 25g
N6688-100mg 4-Nitrophenyl α-L-fuco­pyran­oside, 4-硝基苯-Α-L-吡喃海藻糖苷 [10231-84-2] 100mg
N6672-100mg p-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside 對硝基苯基-beta-D-吡喃葡萄糖苷 [2492-87-7] 100mg
N6694-500mg 4-Nitrophenyl β-D-glucuronide 4-硝基苯基-beta-D-葡萄糖醛酸苷 [10344-94-2] 500mg
N6690-100mg α-p-Nitrophenylglycerol 1-（4-硝基苯基）甘油 [2207-68-3] 100mg
N14K66-25g 4-Nitrophenylhydrazine 4-硝基苯肼 [100-16-3] 25g
NB6689-10mg 2-Nitrophenyl-β-D-xylopyranoside 2-硝基苯基-beta-D-木糖苷 [10238-27-4] 10mg
N5054-100g 5-Nitrosalicylic acid 5-硝基水楊酸 [96-97-9] 100g